玩家有一定数量的生命数，也可以通过拾取绿色的“1UP蘑菇”、收集100个金币、连续踩一定数量的敌人或用龟壳击倒一排敌人增加生命，马力欧受到伤害、坠入悬崖或者时间用完就会失去一条生命，一旦所有生命耗尽游戏便会结束。马力欧主要通过踩到敌人头上进行攻击，不同的敌人会有不同的反应。例如，栗宝宝会被踩扁而亡，而慢慢龟则会暂时缩回龟壳，马力欧可以将其踢开。龟壳撞到墙便会弹回，可以借此击倒敌人，但也可能伤到马力欧自己。打倒敌人的另一个方法是使用“火之花”，马力欧拾取到该道具后会变色（若之前没有使用超级蘑菇则只会变大，之后的版本改成直接变身），并能投出火焰球。“无敌星”是较为少见的道具，经常出现于隐藏砖块中，可以使马力欧短时间内无敌。游戏包含八大世界，每个世界下皆包括4个关卡。此外，游戏内还有一些秘密区域，大部分秘密区含有更多的金币供马力欧收集，而其他则藏有可以跳关的管道，更有难度提升的二周目。

（孟卿）